Las pruebas de cuarta generación realizadas por imnunoenyaso ELISA o inmunoanálisis de micropartículas quimioluminiscente (CMIA) detectan en el suero del paciente los anticuerpos VHI-1 y VHI-2 más el antígeno p24, ambas son técnicas estandarizadas y con adecuado rendimiento. Las resultados de las pruebas de cuarta generación son confiables si se realizan entre los 15 a 20 días posterior a la relación sexual de riesgo.